想必現(xiàn)在有很多小伙伴對于幾種微量臨床樣品基因組DNA快速提取步驟方面的知識都比較想要了解，那么今天小好小編就為大家收集了一些關(guān)于幾種微量臨床樣品基因組DNA快速提取步驟方面的知識分享給大家，希望大家會喜歡哦。

樣品提取步驟

提示：第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!血液樣品a. 取1-100μl血液到1.5ml 的離心管中。b. 如果不足100μl，加入裂解液ML補足到100μl。c.加入10μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混勻，再加入100μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在70℃放置10分鐘。如果處理樣品

干血點a. 用打孔機打孔的方法在血卡(上面有干血點) 上沖取3mm(1/8英寸) 直徑血卡小片(上面有干血點),最多將3個直徑3mm血卡小片放入1.5ml 的離心管中。一般血液應該點在特定紙或者血卡上面干燥,如903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.b.加入180μl裂解液ML。c.加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。d.56℃軌道搖床上面900rpm振搖1小時。如果沒有可加熱軌道搖床，可以在水浴或者heating block上面進行，每10分鐘渦旋振蕩10秒幫助裂解。e.加入200μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻。如果只處理一個3mm血卡小片，建議在200μl結(jié)合液CB 中加入2μl Poly Carrier儲存溶液。f.70℃軌道搖床上面900rpm振搖10分鐘。如果沒有可加熱軌道搖床，可以在水浴或者heating block上面進行，每3分鐘渦旋振蕩10秒幫助裂解。接操作步驟項下7。

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組織樣品a.新鮮或者解凍的組織在液氮中研磨成細粉后或者用解剖刀切成小碎塊（切成微塊可以提高產(chǎn)量）后取

口香糖a.將30mg口香糖切成小塊放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。b.56℃軌道搖床上面900rpm振搖至少3小時。如果沒有可加熱軌道搖床，可以在水浴或者heating block上面進行，每10分鐘渦旋振蕩10秒幫助裂解。c.加入200μl 結(jié)合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。d.70℃軌道搖床上面900rpm振搖1小時。如果沒有可加熱軌道搖床，可以在水浴或者heating block上面進行，每10分鐘渦旋振蕩10秒幫助裂解。e.冷卻后加200μl無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。f.最高速（約14,000rpm）離心1分鐘，取上清加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。接操作步驟項下8。

來主定其政平少真名集傳林，律究稱圓。

法醫(yī)材料a1. 剪下1 cm2煙頭或者過濾嘴外層紙，切成6小塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。a2. 剪下0.5-2.5 cm2信封或者郵票，切成小塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。a3. 從毛發(fā)根部毛囊處開始剪下0.5-1 cm長度毛發(fā)放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。a4. 將指甲剪成小塊放入1.5ml離心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。a5. 將約12.5px2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小塊放入1.5ml離心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) (如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液)，立刻渦旋振蕩充分混勻。接步驟b。b.56℃軌道搖床上面900rpm振搖1小時。如果沒有可加熱軌道搖床，可以在水浴或者heating block上面進行，每10分鐘渦旋振蕩10秒幫助裂解。一般毛發(fā)1小時裂解可以完成，如果不完全可以延長時間。指甲等難裂解物建議過夜裂解。最后沒有裂解的不溶物在后續(xù)步驟e中會通過離心去除。c.加入200μl結(jié)合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。d.70℃軌道搖床上面900rpm振搖1小時。e.最高速（約14,000rpm）離心1分鐘，取上清加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。接操作步驟項下8。

微切割樣品（包括福爾馬林固定的微切割樣品）a.加入15μl裂解液ML 到0.2 ml 離心管中，放入微切割樣品。b.加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) ，立刻渦旋振蕩充分混勻。c.56℃水浴3小時（福爾馬林樣品16小時）至裂解完全，中間不時顛倒渦旋。d.加入15μl裂解液ML，再加入50μl結(jié)合液CB（加入1μl PolyCarrier），立刻渦旋振蕩充分混勻。e.冷卻后加入50μl無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，室溫放置5分鐘。如果周圍環(huán)境高于25℃,乙醇需要冰上預冷后再加入。接操作步驟項下7。

用點由程位聲話織布非，青準。

將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。

加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

加入600μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加20－50μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預熱效果更好）， 室溫放置2-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于20μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

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