每日小編都會(huì)為大家?guī)硪恍┲R(shí)類的文章,那么今天小編為大家?guī)淼氖且镩L(zhǎng)度越長(zhǎng),到底是特異性增加還是減少呢?方面的消息知識(shí),那么如果各位小伙伴感興趣的話可以,認(rèn)真的查閱一下下面的內(nèi)容哦。
引物長(zhǎng)度越長(zhǎng),特異性增加。但是也要在一定范圍內(nèi)才正確。不是引物越長(zhǎng)越好的。
“引物越長(zhǎng),能夠配對(duì)的概率減少,所以特異性增加or引物越長(zhǎng),包含的堿基越多,發(fā)生錯(cuò)配的概率就越高”都對(duì),是從問題的不同角度考量的。前者是從避免隨機(jī)結(jié)合的角度看,后者是從堿基配對(duì)的精度上看。所以不能一刀切。
但是,就配對(duì)精度上來說,這個(gè)不是引物應(yīng)該考慮的,因?yàn)槿魏我粋€(gè)堿基配對(duì)的時(shí)候都有可能出錯(cuò),并且是獨(dú)立事件??傮w上看較長(zhǎng)引物包含的堿基多,總概率增加,但是不代表每個(gè)堿基配對(duì)精度有改變。哪怕只有1BP的引物,還是存在錯(cuò)配的可能性。所以這個(gè)不是重點(diǎn),重點(diǎn)是特異性。
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一般來說,1。引物長(zhǎng)度要大于16BP,一般為20到24個(gè)最合適,因?yàn)?的16次方=4290000000,大于了哺乳動(dòng)物單倍體基因組300000000的數(shù)量,可以防止隨機(jī)結(jié)合了。
2。引物與靶序列間的Tm值不應(yīng)該小于55度。小雨30BP的引物按照Tm=4(G+C)+2(A+T)來估計(jì)。
3。引物不應(yīng)該有發(fā)卡結(jié)構(gòu),不能有4BP以上的回文序列
4。2個(gè)引物之間不應(yīng)該有大于4BP的互補(bǔ)序列或者同源序列。在3`端不應(yīng)該有任何互補(bǔ)堿基,避免引物二聚體。
4。堿基分布竟可能均勻,G+C接近50%
下著自此結(jié)系計(jì)根放名科算寫。
要滿足以上4個(gè)條件,難度隨著引物長(zhǎng)度增加而急劇加大。。。所以長(zhǎng)度適中就好。一般來說,避免了隨機(jī)結(jié)合就能保證其特異性了。
著業(yè)天通果,料品九改積。
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